■ 產(chǎn)品介紹
KM71H是畢赤酵母菌株，屬于真核細胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養(yǎng)菌株污染，往往會在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素，來抑制細菌菌的污染和生長。 KM71H畢赤酵母被推薦用來表達含有Zeocin抗性的載體載體重組質(zhì)粒，例如pPICZ A,B,C系列的載體。 在篩選KM71H重組轉(zhuǎn)化菌株時，Zeocin抗生素的工作濃度是100μg/ml。 KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一個片段缺失，當(dāng)pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C轉(zhuǎn)化到KM71H中時只能產(chǎn)生出MutS轉(zhuǎn)化株，不必在進行Mut基因型的篩選了。 KM71H的來源母細胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一個突變,這使得菌株無法在不含有精氨酸的培養(yǎng)基中生長。而KM71H酵母細胞中在AOX1基因處插入了一個正常的arg4基因，從而形成了KM71H的MutS, Arg+表型。 將約2kb的Arg4基因克隆出來后插入到KM71H來源菌株內(nèi)的野生型的AOX1基因的BamH I（16bp）和Sal I（227bp）中間，從而構(gòu)建成功KM71H。ARG4基因直接替換了AOX1基因的16-227片段序列。 KM71H畢赤酵母細胞的優(yōu)點是不需要利用甲醇minimal media篩選菌株的Mut基因型，因為所有的轉(zhuǎn)化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并沒有被完全刪除，理論上你可以用自己的基因替換其中的Arg4基因，從而生成MutS, Arg-的轉(zhuǎn)化株，但是由于實驗表明該基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生長，所以并不鼓勵大家進行這種基因替換嘗試。 |
基因型： | aox1::ARG4, arg4 |
■ 基本信息
培養(yǎng)基: | YPDA |
菌株類別: | 酵母菌 |
培養(yǎng)條件: | 28℃，有氧，YPDA |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化: | 電激 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應(yīng)用: | 用于蛋白表達 |
備注: | 可參考 Invitrogen C18200 |
■ 使用方法
建議超凈臺內(nèi)劃線涂板，得到單克隆后再進行其他實驗操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 酵母菌在YPD培養(yǎng)基上會變粉，是正常現(xiàn)象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復(fù)凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實驗室研究，不能用于動物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
